Hướng Dẫn Sử Dụng Đĩa Petrifilm Kiểm Tra E.Coli Và Coliform 3M

Hướng Dẫn Sử Dụng Đĩa Petrifilm Kiểm Tra E.Coli Và Coliform 3M

Đĩa Petrifilm E.Coli/Coliform Count (EC) có chứa Violet Red Bile (VRB), chất gel tan được trong nước lạnh,

chất chỉ thị hoạt động của glucuronidase và một chất chỉ thị giúp cho việc đếm khuẩn lạc dễ dàng hơn. Hầu hết

E.coli (khoảng 97%) sinh beta-glucuronidase, chất này tạo tủa màu xanh gắn kết với khuẩn lạc. Tấm film phía

trên giữ bọt khí sinh ra từ quá trình lên men lactose của E.coli và coliforms. Khoảng 95% E.coli có sinh bọt khí,

cho khuẩn lạc có màu từ xanh đến xanh – đỏ kèm theo bọt khí trên đĩa Petrifilm.

AOAC INTERATIONAL và U.S FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) xác định Coliforms là trực khuẩn gram âm, hình que, sinh hơi và acid suốt quá trình lên men chuyển hoá lactose. Khuẩn lạc coliform phát triển trên đĩa Petrifilm 3M EC sinh acid, chất chỉ thị pH trong đĩa làm cho lớp keo có màu đỏ. Khí sinh ra được giữ lại xung quanh khuẩn lạc Coliform màu đỏ là dấu hiệu để xác định Coliform.

Việc xác định E. coli có thể theo nhiều cách khác nhau theo từng quôc gia. (Xem phần hướng dẫn thời gian và nhiệt độ ủ ). Theo AOAC INTERNATIONAL:

– E.coli = 49 (khuẩn lạc màu xanh có khí).

– Coliform tổng = 87 (khuẩn lạc xanh và đỏ có khí).

Đĩa Petrifilm 3M xác định Ecoli

Không sử dụng đĩa này riêng rẻ để phát hiện E. coli O157. Như hầu hết những môi trường kiểm tra E.coli/coliform khác, đĩa này sẽ không hiển thị đặc biệt với bất kì dòng O157 nào hiện diện.

Sự thay đổi màu sắc của gel

Không mọc = 0

Chú ý sự thay đổi màu sắc c ủa gel từ hình 2 – 8. Khi số lượng E.coli hay coliform tăng, lớp gel sẽ chuyển sang màu đỏ đậm hoặc tím xanh.

Những bọt khí li ti là đặc tính của lớp gel, không phải do E.coli hay coliform sinh ra (ô vuông 1).

Sự thay đổi màu sắc của gelSố khuẩn lạc E.coli = 13

Số lượng coliform tổng = 28

Số lượng khuẩn lạc đếm được trên đĩa petrifilm EC là từ 15 – 150.

Không đếm số khuẩn lạc ngoài rìa vì chúng không chịu ảnh hưởng của môi trường chọn lọc (xem vòng 1).

Sự có mặt của Ecoli

Số khuẩn lạc E.coli = 3

Bất cứ khuẩn lạc nào có màu xanh (từ xanh đến xanh đỏ) đều biểu hiện sự có mặt của E. coli. Chiếu sáng phía trước sẽ làm nổi bật màu xanh kết tủa trong khuẩn lạc.

kêt t a trong khuan l c.

Vòng tròn 1 cho thấy khuẩn lạc có màu đỏ xanh khi chiếu sáng từ phía sau. Vòng tròn 2 cũng là khuẩn lạc đó và được chiếu sáng từ phía trước. Màu xanh nhìn thây rõ ràng hơn ở vòng tròn 2.

Số khuẩn lạc Ecoli

Số khuẩn lạc E.coli = 17

Ước lượng coliform tổng = 150

Diện tích môi trường nuôi cấy khoảng 20cm2. Ước lượng khi số khuẩn lạc trên đĩa nhiều hơn 150 bằng cách đếm số lượng khuẩn lạc trong 1 hoặc vài ô đại diện và xác định số lượng trung bình trên 1 ô vuông. Nhân số trung bình này với 20 sẽ ước lượng được số khuẩn lạc trên từng đĩa.

Số lượng khuẩn lạc quá nhiều

Số lượng khuẩn lạc thưc ~ 10 lũy thừa 6

Những đĩa Petrifilm EC có số lượng khuẩn lạc quá nhiều không thể đếm được có một trong những đặc điểm sau: nhiều khuẩn lạc nhỏ, nhiều bọt khí li ti, phía dưới lớp gel có màu đỏ đến xanh tím.

Số lượng khuẩn lạc thực

Số lượng khuẩn lạc thưc ~ 10 lũy thừa 8

Sự tập trung cao của E.coli sẽ tạo nên khu vực phát triển sang màu tía – xanh.

Số lượng khuẩn lạcSố lượng khuẩn lạc E.coli ~ 8

Ước lượng coliform tổng ~ 10 lũy thừa 8.

Khi số lượng coliform cao (>10 lũy thừa 8), một số chửng E.coli có thể sinh ít khí và màu xanh khuẩn lạc không rõ. Tất cả khuẩn lạc màu xanh, không có bọt khí được coi là E.coli. Lấy những khuẩn lạc màu xanh không có bọt khí kiểm tra lại nếu cần.

Đĩa petrifilm EC chuyển sang màu vàng

 

Số lượng khuẩn lạc thực ~ 10 lũy thừa 8

Khi số lượng vi sinh không phải coliform cao như Pseudomonas thì lớp gel trên đĩa Petrifilm EC sẽ chuyển sang màu vàng.

* Bọt khí

Coliform hình dạng bất thường

Coliform tổng = 3

Những mẫu thực phẩm nhỏ có hình dạng bất thường và không gắn kết với bọt khí.

Các dạng bọt khí

Coliform tổng = 78

Bọt khí có nhiều dạng khác nhau. Bọt khí có thể làm vỡ khuẩn lạc vì thế khuẩn lạc nằm phía ngoài bọt khí . Xem vòng tròn 1 và 2.

Bọt khí có thể sinh ra do thao tác cấy không tốt hoặc khí từ mẫu bị giữ lại. Chúng có hình dạng bất thường và không liên quan đến khuẩn lạc. Xem vòng 3.

Hình dạng bọt khí sinh ra từ khuẩn lạc

 

Hình 1 – 10 cho thấy những hình dạng bọt khí khác nhau sinh ra từ khuẩn lạc. Tất cả các dạng trên đều được đếm.

Bảo quản

Bảo quản đĩa Petrifilm Ecoli 3M

 

Chuẩn bị mẫuChuẩn bị mẫu đĩa Petrifilm Ecoli 3M

 Ủ mẫu

Ủ mẫu đĩa Petrifilm Ecoli 3M

 

Các bước ủ mẫu đĩa Petrifilm Ecoli 3M

 

Ủ mẫu và đọc kết quả đĩa Petrifilm Ecoli 3M

 

* Thời gian và nhiệt độ khác nhau theo từng phương pháp. Những phương pháp chung nhất đã được chứng minh.

– AOAC Official Method 991. 14.

+ Đối với coliforms: Ủ 24h ± 2h 35°C ± 1°C.

+ Đối với E.coli : Ủ 48h ± 2h 35°C ± 1°C.

– AOAC Official Method 998. 08

+ Đối với E.coli (trong thịt, thịt gia cầm và hải sản): Ủ 24h ± 2h 35°C ± 1°C.

– NMKL method (147.1993)

+ Đối với coliforms: Ủ 24h ± 2h 37°C.

+ Đối với E.coli: q 48h ± 2h 37°C.